王卉主任：流式細(xì)胞術(shù)檢測腦脊液腫瘤細(xì)胞的專家共識(shí)解讀

2021年8月出版的《中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》上，重磅推出了中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會(huì)組織專家編寫的《流式細(xì)胞術(shù)檢測腦脊液腫瘤細(xì)胞的專家共識(shí)》。這篇共識(shí)由河北燕達(dá)陸道培醫(yī)院王卉主任和中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院劉貴建主任執(zhí)筆并擔(dān)任通訊作者，來自全國30多家三甲醫(yī)院的40多位專家經(jīng)過研究討論共同完成。

為了讓大家更好了解這篇共識(shí)，王卉主任做了解讀。

中樞神經(jīng)系統(tǒng)是多種造血及淋巴系統(tǒng)腫瘤和非造血系統(tǒng)腫瘤容易累及的部位，急性白血病中樞累及發(fā)生率30%左右，淋巴瘤累及率5%~25%。腦脊液檢測是評(píng)價(jià)腫瘤中樞神經(jīng)系統(tǒng)受累的重要依據(jù)。長期以來認(rèn)為細(xì)胞學(xué)檢查是金標(biāo)準(zhǔn)，然而細(xì)胞學(xué)檢查的敏感性較低，特別是在低細(xì)胞含量的樣本中敏感度更低，這些情況可能延誤患者的正確診斷和治療。

流式細(xì)胞術(shù)是上個(gè)世紀(jì)70年代問世的重要免疫學(xué)技術(shù)，尤其是近30年來在血液和免疫學(xué)領(lǐng)域取得快速進(jìn)展，成為不可或缺的診斷工具。腦脊液檢測方法中，流式細(xì)胞術(shù)幾乎是目前所有技術(shù)中最快速、靈敏、實(shí)用的技術(shù)，可以極大程度提高腦脊液腫瘤細(xì)胞的檢出率。

鑒于腦脊液這種微量細(xì)胞標(biāo)本的檢測不同于骨髓、外周血等常規(guī)標(biāo)本，為了規(guī)范操作，減少因技術(shù)層面導(dǎo)致的假陰性、假陽性，提高檢測靈敏度和特異性，中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會(huì)組織制定了《流式細(xì)胞術(shù)檢測腦脊液腫瘤細(xì)胞的專家共識(shí)》（簡稱《共識(shí)》）

腦脊液檢測腫瘤細(xì)胞到底有多重要呢？

王卉主任舉了一個(gè)例子，十年前一個(gè)夜晚，北京一家大三甲醫(yī)院焦急的患者父親送來一份腦脊液標(biāo)本。患兒是發(fā)熱和頸項(xiàng)僵直的狀態(tài)，臨床醫(yī)生首先考慮的是腦膜炎，王卉主任親自進(jìn)行檢測，正常腦脊液中細(xì)胞較少，T淋巴細(xì)胞為主，以及少量單核細(xì)胞，其他細(xì)胞很難見到。該標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)了一群CD45陰性CD56陽性細(xì)胞。首先考慮非造血系統(tǒng)腫瘤細(xì)胞可能性大，后來連夜做了更多的標(biāo)志證實(shí)為神經(jīng)母細(xì)胞瘤。及時(shí)反饋給臨床醫(yī)師，盡快進(jìn)一步完善檢查，最后證實(shí)該診斷，患兒獲得及時(shí)正確的治療，至今狀態(tài)良好。

該病例腦脊液細(xì)胞數(shù)量增多不明顯，因此其他檢測結(jié)果不能提供幫助，流式成為第一個(gè)做出正確診斷提示的技術(shù)。

雖然流式細(xì)胞術(shù)檢測腦脊液非常重要，但是檢測的困難程度限制了該項(xiàng)目的廣泛臨床應(yīng)用。因此專家們就適用范圍、檢測方案、操作中注意事項(xiàng)、發(fā)出合理的報(bào)告等幾個(gè)方面詳盡提出推薦方法和推薦強(qiáng)度。

共識(shí)指出：急性白血病、淋巴瘤、轉(zhuǎn)移癌等多種淋巴造血和非造血腫瘤都有可能累及中樞神經(jīng)系統(tǒng)，因此急性白血病、有癥狀的其他腫瘤應(yīng)盡可能進(jìn)行腦脊液的流式細(xì)胞術(shù)檢測。

由于腦脊液無法大量取材，細(xì)胞數(shù)量少，細(xì)胞存活時(shí)間短等特點(diǎn)，給該技術(shù)檢測帶來挑戰(zhàn)，因此操作和分析過程很重要。

腦脊液標(biāo)本流式細(xì)胞術(shù)檢測的要點(diǎn)在于：

1、采集后盡快低溫送檢。最好不要超過4-8小時(shí)送到，實(shí)驗(yàn)室接到標(biāo)本后盡快處理。

2、處理過程中注意回收每一個(gè)細(xì)胞，尤其是標(biāo)記、離心、洗滌的過程中，盡量使用尖底EP管或者試管，用吸管或者移液器去上清。

3、注意保持流式細(xì)胞儀的管道清潔。注意體現(xiàn)為日常儀器保養(yǎng)，以及上樣前注意沖洗進(jìn)樣針和管道，避免管間污染。

4、方案設(shè)計(jì)中，注意覆蓋常見疾病重要診斷相關(guān)標(biāo)志，并且因?yàn)榘麧{染色處理過程復(fù)雜，容易丟失細(xì)胞，所以盡量使用胞膜抗體替代胞漿抗體，除非細(xì)胞量大，或者不可替代的情況下，才會(huì)使用胞漿抗體。

5、獲取前，使用血液標(biāo)本調(diào)整好儀器條件，避免用珍貴的腦脊液標(biāo)本調(diào)整儀器條件。

6、獲取過程中，注意盡可能收集所有腦脊液細(xì)胞。但是也要避免獲空。

7、分析過程中，注意正確識(shí)別非特異性染色、死細(xì)胞與真正的細(xì)胞。

8、報(bào)告的時(shí)候，因?yàn)槟X脊液標(biāo)本細(xì)胞數(shù)量少，而流式細(xì)胞術(shù)對(duì)于細(xì)胞檢測真實(shí)性有效性的判斷，一般是要求最少20-25個(gè)有效細(xì)胞（特殊情況下，有人提出10個(gè)細(xì)胞聚集、背景干凈，可以判斷有效），因此除了報(bào)告腫瘤細(xì)胞的比例，還要求給出細(xì)胞數(shù)，就是為了準(zhǔn)確判斷腫瘤負(fù)荷和報(bào)告的可靠性。比如同樣20%腫瘤細(xì)胞，一個(gè)報(bào)告是8個(gè)細(xì)胞，一個(gè)報(bào)告是2000個(gè)細(xì)胞，前者結(jié)果可信度不高，后者是有效報(bào)告。

鑒于臨床實(shí)際工作當(dāng)中，大家所用機(jī)型不一致，如四色流式、八色流式、十色流式，甚至20多色的全光譜流式。雖然目前主流機(jī)型是3激光8-10色，但是為了讓共識(shí)更具有適用性、可行性、普及性，筆者提供了不同方案供大家選擇。對(duì)于這種方案推薦，共識(shí)中尊重每一個(gè)單位，采取建議參考的方式。

共識(shí)中建議大家隨報(bào)告提供彩色圖片，因?yàn)槟[瘤是一個(gè)重大疾病，治療過程漫長，患者經(jīng)常會(huì)轉(zhuǎn)院和會(huì)診，并根據(jù)初治免疫分型進(jìn)行隨訪，所以經(jīng)常會(huì)需要報(bào)告供同行參考。彩色圖片是提供給同行參考的重要圖像依據(jù)。

總之，流式細(xì)胞術(shù)檢測腦脊液腫瘤細(xì)胞非常重要，為了更好地讓每個(gè)有條件的實(shí)驗(yàn)室做好流式細(xì)胞術(shù)檢測腦脊液標(biāo)本，王卉主任和劉貴建主任代表中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會(huì)組織眾多行業(yè)內(nèi)著名專家完成了這個(gè)共識(shí)。希望給臨床醫(yī)師提供快速、準(zhǔn)確的報(bào)告，從而讓患者盡早獲得精確診斷和適當(dāng)治療。